Pseudomonas aeruginosa associated pulmonary infections and in vitro amplification virulent rhamnolipid (rhlR) gene / Infecções pulmonares associadas a Pseudomonas aeruginosa e gene ramnolipídeo virulento (rhlR) da amplificação in vitro

Background: Pseudomonas aeruginosa is a common opportunistic pathogenic bacterium with the ability to develop a strong communication pathway by quorum sensing system and different virulent factors. Among the various important secretions of P. aeruginosa rhamnolipid is important biological detergent, believed to be involved in the development of the biofilm and intercellular communication. It readily dissolves the lung surfactants that are then easily catalyzed by the phospholipases and in this way is involved in the acute pulmonary infection. Objective: research work was designed to investigate virulence and gene associated with virulence in P. aeruginosa responsible for pulmonary infections. Methods: In current study polymerase chain reaction (PCR) was used for the detection of the rhlR (rhamnolipid encoding) gene of isolated strains. A number of assays were performed that ensured its virulent behavior. Disc diffusion method was used to check its antibiotic resistance. Isolated strains were resistant to a number of antibiotics applied. Result: It was found that males are more prone to respiratory infections as compared to females. Male members with age of 44-58 and 59-73 are at a higher risk, while females with age of 44-58 are also at a risk of pulmonary infections. Antibiotic resistance was observed by measuringzone of inhibition in strains GCU-SG-M4, GCU-SG-M3, GCU-SG-M5, GCU-SG-M2, GCU-SG-M1 and GCU-SG-M6. GCU-SG-M2 was resistant to fluconazole (FLU), clarithromycin (CLR), cefixime (CFM) and Penicillin (P10). No zone of inhibition was observed. But it showed unusual diffused zone around the Ak and MEM antibiotic discs. rhl R gene and 16s rRNA gene were characterized and analyzed. Conclusion: Findings from current study would help[...].

Antecedentes: Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria patogênica oportunista comum, com a capacidade de desenvolver uma forte via de comunicação pelo sistema de detecção de quorum e diferentes fatores virulentos. Entre as várias secreções importantes de P. aeruginosa rhamnolipid, há um importante detergente biológico, que se acredita estar envolvido no desenvolvimento do biofilme e na comunicação intercelular. Dissolve rapidamente os surfactantes pulmonares que são facilmente catalisados pelas fosfolipases e, dessa maneira, estão envolvidos na infecção pulmonar aguda. Objetivo: O trabalho de pesquisa foi desenhado para investigar a virulência e o gene associado à virulência em P. aeruginosa responsável por infecções pulmonares. Métodos: No presente estudo, a reação em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para a detecção do gene rhlR (codificação ramnolipídeo) de cepas isoladas. Foram realizados vários ensaios que garantiram seu comportamento virulento. O método de difusão em disco foi utilizado para verificar sua resistência a antibióticos. As estirpes isoladas foram resistentes a vários antibióticos aplicados. Resultado: Verificou-se que os homens são mais propensos a infecções respiratórias em comparação às mulheres. Membros do sexo masculino com idade entre 44 e 58 e 59 e 73 anos correm maior risco, enquanto mulheres com idade entre 44 e 58 anos também correm risco de infecções pulmonares. A resistência aos antibióticos foi observada medindo a zona de inibição nas cepas GCU-SG-M4, GCU-SG-M3, GCU-SG-M5, GCU-SG-M2, GCU-SG-M1 e GCU-SG-M6. O GCU-SG-M2 foi resistente ao fluconazol (FLU), claritromicina (CLR), cefixima (CFM) e penicilina (P10). Nenhuma zona de inibição foi observada. Mas se notou uma zona difusa incomum ao redor dos discos antibióticos Ak e MEM. Os genes rhl R e 16s rRNA foram caracterizados e analisados. Conclusão: As conclusões do presente estudo ajudariam a aumentar a conscientização sobre a resistência a antibióticos de, [...].

Neonatal infection and passive acquisition of serum total IgG and reactive with Streptococcus B, anti-LPS of Klebsiella spp and Pseudomonas spp antibodies in twins

SUMMARY OBJECTIVE To describe the concentration of total and specific IgG antibodies anti-Streptococcus B, anti-lipopolysaccharide of Klebsiella spp, and anti-lipopolysaccharide of Pseudomonas spp in the umbilical cord of newborn(NB) twins and to analyze the association between neonatal infection and antibody concentration in the umbilical cord blood. METHODS A prospective cross-sectional study of a cohort of NB twins admitted during the period of 20 months. Patients with malformations and mothers with infection were excluded. Variables analyzed: gestational age(GA); birth weight(BW); antibody concentrations in umbilical cord blood; infection episodes. We used the paired Student t-test, Spearman correlation, and generalized estimation equation. RESULTS 57 pairs of twins were included, 4 excluded, making the sample of 110 newborns. GA=36±1.65weeks and BW=2304.8±460g(mean±SD). Antibody concentrations in twins(mean±SD): total IgG=835.71±190.73mg/dL, anti-StreptococcusB IgG=250.66±295.1 AU/mL, anti-lipopolysaccharide of Pseudomonas spp IgG=280.04±498.66 AU/mL and anti-lipopolysaccharide of Klebsiella spp IgG=504.75±933.93 AU/mL. There was a positive correlation between maternal antibody levels and those observed in newborns(p <0.005). The transplacental transfer of maternal total IgG and anti-LPS Pseudomonas IgG antibodies was significantly lower at NB GA <34 weeks(p <0.05). Five newborns were diagnosed with an infection. Infants with infection had significantly lower total IgG concentration(p <0.05). CONCLUSION This study showed a positive correlation between maternal and newborn antibodies levels. In infants younger than 34 weeks there is less transfer of total IgG and anti-LPS Pseudomonas IgG. The highest incidence of infection in the newborn group who had significantly lower total IgG serum antibodies reinforces the importance of anti-infectious protection afforded by passive immunity transferred from the mother.

RESUMO OBJETIVOS Descrever o título de anticorpos IgG total e específico anti-Streptococcus B, anti-lipopolissacarídeos(LPS) de Klebsiella e Pseudomonas no cordão umbilical em gêmeos e analisar a possível associação entre os títulos desses anticorpos e a ocorrência de infecção. MÉTODOS Estudo prospectivo transversal de uma coorte de recém-nascidos (RN) gemelares em 20 meses. Excluídos: malformação, infecção congênita ou materna. Variáveis estudadas: idade gestacional(IG); peso de nascimento(PN); título de anticorpos e episódios de infecção. Foram utilizados testes t-Student pareado, correlação de Spearman e equações de estimação generalizadas. RESULTADOS Elegíveis 59 pares de gêmeos, excluídos 4 e incluídos 55 pares (n=110RN). A IG foi 36±1,65semanas e o PN foi 2304,8±460g (média±DP). Concentrações de anticorpos dos RN(média±DP): IgG total=835,71±190,73 mg/dL, IgG anti-Streptococcus B=295,1±250,66 UA/mL, IgG anti-LPS Pseudomonas=280,04±498,66 UA/mL e IgG anti-LPS Klebsiella=504,75± 933,93UA/mL. Houve correlação positiva entre níveis de anticorpos maternos e aqueles observados nos RN (p<0,005). A transferência transplacentária de anticorpos maternos IgG total e IgG anti-LPS Pseudomonas foi significativamente menor em RN IG < 34semanas (p<0,05). Foram diagnosticados 5 RN com infecção. Os RN que apresentaram infecção tinham concentração de IgG total significativamente menor (p<0,05). CONCLUSÕES Na população estudada existe correlação entre os anticorpos maternos e os níveis de anticorpos no RN. Nos gêmeos menores que 34 semanas há menor transferência de IgG total e IgG anti-LPS Pseudomonas. Nos RN com infecção a concentração de IgG total é significativamente menor, o que demonstra a maior vulnerabilidade e risco de infecção dessa população e a importância da imunidade passiva transferida pela placenta.

Atividade pró-trombótica da toxina ExoU de Pseudomonas aeruginosa detectada em modelos experimentais in vivo e in vitro / Prothrombotic activity of the Pseudomonas aeruginosa toxin ExoU detected in experimental models in vivo and in vitro

Pseudomonas aeruginosa é um importante agente de pneumonia, particularmente em pacientes submetidos à ventilação mecânica, que pode evoluir para sepse, com elevadas taxas de letalidade. Na sepse, o processo inflamatório sistêmico exacerbado favorece o desequilíbrio entre as vias de coagulação e fibrinólise e a instalação de um estado pró-coagulante, com o aparecimento de trombose microvascular, coagulação intravascular disseminada e falência de múltiplos órgãos. Conhecendo a potente atividade pró-inflamatória da toxina ExoU produzida por P. aeruginosa, decorrente de sua atividade fosfolipásica A2, o objetivo desta tese foi investigar seu potencial de indução de alterações hemostáticas relacionadas à patogênese da sepse. Utilizando modelo de sepse em camundongos inoculados, por via intratraqueal, com suspensões de P. aeruginosa produtora de ExoU (PA103) ou de cepa com deleção do gene exoU, não produtora da toxina, foi mostrado que ExoU determinou maior gravidade da infecção, maior taxa de letalidade, leucopenia, trombocitose, hiperpermeabilidade vascular e transudação plasmática, evidenciadas, respectivamente, pela maior concentração de proteínas nos lavados broncoalveolares (LBAs) e acúmulo do corante Azul de Evans, previamente inoculado nos animais, por via endovenosa, no parênquima renal. ExoU favoreceu, também, a ativação plaquetária, confirmada pela maior concentração de plaquetas expressando P-seletina em sua supefície, maior número de micropartículas derivadas de plaquetas e maior concentração plasmática de tromboxano A2. A histopatologia dos pulmões e rins dos animais infectados com PA103 confirmou a formação de microtrombos, que não foram detectados nos animais controles ou infectados com a cepa mutante. Nos pulmões, a produção de ExoU determinou intensa resposta inflamatória com maior concentração de leucócitos totais e polimorfonucleados, interleucina-6 e fator de necrose tumoral-alfa nos LBAs. A análise imunohistoquímica mostrou intensa deposição...

Pseudomonas aeruginosa is an important agent of pneumonia, mainly in patients undergoing mechanical ventilation, which can progress to sepsis with high mortality rates. In sepsis, the systemic inflammatory process favors exacerbated imbalance between the coagulation and fibrinolysis pathways and the installation of a procoagulant state, leading to microvascular thrombosis, disseminated intravascular coagulation and multiple organ failure. Knowing the powerful proinflammatory activity of the P. aeruginosa toxin ExoU, secondary to its phospholipase A2 activity, the goal of this study was to investigate the ExoU potential to induce hemostatic changes related to sepsis pathogenesis. By using a murine model of pneumosepsis, obtained by the intratracheal injection of suspensions of the ExoU-producing PA103 P. aeruginosa strain or of its isogenic mutant PA103 exoU, defective in the toxin synthesis, ExoU was shown to enhance the severity of the infection and to induce higher mice mortality rate as well as leukopenia, thrombocytosis, vascular hyperpermeability and plasma transudation, evidenced, respectively, by the higher protein concentration in the bronchoalveolar lavage fluids (BALF) and accumulation of Evans blue dye, previously intravenous infectioned, in mice renal parenchyma. ExoU also favored platelet activation, evidenced by the higher concentration of platelets expressing P-selectin on their surface, greater number of platelet-derived microparticles and increased plasma concentration of thromboxane A2. Histopathology of the lungs and kidneys of PA103 - infected animals confirmed the formation of microthrombi, which were not detected in controls or in animals infected with the bacterial mutant. In lungs, ExoU induced an intense inflammatory response with high concentrations of total and polymorphonuclear leukocytes, interleukin-6 and tumor necrosis factor-alfa in mice BALF. Immunohistochemical analysis showed intense fibrin deposition in the alveoli...

Epidemiological study of Pseudomonas aeruginosa isolated from clinical specimens.

The epidemiology of Pseudomonas aeruginosa infection was studied in Siriraj Hospital. During April 1989-June 1990, P. aeruginosa 436 strains were isolated from clinical specimens of 260 patients, ie blood (19 strains), pus (192 strains), sputum (159 strains) and urine (66 strains). By using a combination of serogroups and pyocin types as epidemiological markers, it was found that there were 10 serogroups and 8 pyocin types which can be differentiated into 33 serogroup/pyocin types or patterns. The most common pattern was E 211111 (26.3%) followed by B 121614 (24.5%), G 373112 (13%) and L 888888 (7.1%), respectively.